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    高效液相色譜儀在使用方面還是有些技巧的

  • 發(fā)布日期:2023-09-26      瀏覽次數:734
    •   高效液相色譜是目前應用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系統由流動(dòng)相儲液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類(lèi)似于氣相色譜,但是針對其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩;進(jìn)樣系統要求進(jìn)樣便利切換嚴密;由于液體流動(dòng)相粘度遠遠高于氣體,為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(cháng)度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
        高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中做相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)。
        高效液相色譜儀的使用技巧:
        1、樣品準備:樣品準備對HPLC分析結果至關(guān)重要。確保樣品純凈,并根據所需分離目標選擇適當的提取、凈化和濃縮方法。
        2、色譜柱選擇:根據需要分離的化合物特性選擇合適的色譜柱??紤]分離機理、柱填料類(lèi)型、柱尺寸和固定相親水/疏水性等因素。
        3、流動(dòng)相選擇:根據待分離物的極性選擇合適的流動(dòng)相組合。優(yōu)化溶劑體系,平衡分辨率和保留時(shí)間。
        4、校準曲線(xiàn):為了定量分析,建立準確的校準曲線(xiàn)并進(jìn)行適當的驗證。使用已知濃度的標準品制備一系列濃度點(diǎn),并確定響應因子或檢測靈敏度。
        5、進(jìn)樣方法:選擇適當的進(jìn)樣方法,如自動(dòng)進(jìn)樣器或手動(dòng)進(jìn)樣。確保進(jìn)樣量恒定且符合儀器要求。
        6、溫度控制:一些分析可能需要在特定溫度下進(jìn)行。使用恒溫箱或列溫控制器確保色譜柱處于穩定的溫度條件下。
        7、檢測器設置:根據目標化合物的特性選擇合適的檢測器。常見(jiàn)的檢測器包括紫外-可見(jiàn)光譜檢測器(UV-Vis)、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器等。
        8、數據分析:正確解釋和分析HPLC數據是確保準確結果的關(guān)鍵。使用合適的軟件進(jìn)行峰識別、積分和定量計算。
        9、儀器維護:定期進(jìn)行儀器維護和校準,包括清洗色譜柱、更換流動(dòng)相溶劑和檢查液壓系統等。
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